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蛋白酶K的配制標(biāo)準(zhǔn)及保存方法
2021-10-26
蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。蛋白酶Ｋ主要應(yīng)用于基因檢測中基因抽取，是檢測試劑盒生產(chǎn)的重要原料，蛋白酶K產(chǎn)品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質(zhì)的能力，因而被廣泛應(yīng)用于制備脈沖電泳的染色體DNA，以及去除DNA和RNA中的核酸酶?，F(xiàn)有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)：20mg/ml蛋白酶K配制標(biāo)準(zhǔn)(proteinaseK)：將2...
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使用CCK-8要注意的事項(xiàng)有哪些
2021-10-25
CellCountingKit-8（簡稱CCK8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。相信做細(xì)胞的同學(xué)對他都很熟悉，你確定你使用CCK-8試劑的方式是*正確的嗎？使用CCK-8要注意的事項(xiàng)有哪些：1.酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。2.CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。3.當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤...
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胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異有哪些
2021-09-26
胎牛血清（FetalBovineSerum,FBS）是在屠宰懷孕母牛的時候，通過心臟穿刺采取胎牛血獲取的血清，因其未與外界環(huán)境接觸，所以血清內(nèi)IgG等免疫因子相對含量較少，適合用于免疫類細(xì)胞的培養(yǎng)。胎牛血清與新生牛血清在蛋白組成上的差異還是很明顯的。首先，胎牛血清總蛋白含量（g/dl）約為2%-4%,新生牛血清約為3.0%-5.0%,成牛血清則高達(dá)8%-10%.從蛋白含量上也可以初步判斷一個血清是否為胎?；蛐律Ｑ?，蛋白含量越高說明牛齡越大，目前檢測蛋白含量是初步檢測一項(xiàng)重...
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常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
2021-08-29
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫...
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一文帶你了解關(guān)于細(xì)胞增殖的知識
2021-08-27
一、什么是細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞。二、細(xì)胞增殖的意義和方式意義：細(xì)胞增殖是生活細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征。細(xì)胞的增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。方式：真核生物的分裂依據(jù)過程不同有三種方式，有有絲分裂，無絲分裂，減數(shù)分裂。其中有絲分裂是人、動物、植物、真菌等一切真核生物中的一種zui為普遍的分...
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預(yù)染蛋白Marker和未預(yù)染蛋白Marker有哪些不一樣
2021-07-27
在Western實(shí)驗(yàn)中，蛋白Marker可以監(jiān)控蛋白質(zhì)在SDS-PAGE中的遷移，監(jiān)控蛋白的轉(zhuǎn)膜效率，確定蛋白分子量大小。選擇正確的蛋白Marker是westernblot實(shí)驗(yàn)成功的條件之一。蛋白Marker分為兩種：一種是未預(yù)染的Marker，即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)，高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)；另一種是預(yù)染的Marker，即單色預(yù)染和多色預(yù)染。一、未預(yù)染蛋白Marker未預(yù)染的蛋白Marker是簡單，也是最準(zhǔn)確的一種，由于沒有附帶染料分子或者標(biāo)記大小正好是蛋白原本的大小...
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如何避免胎牛血清使用時出現(xiàn)黑點(diǎn)
2021-06-27
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們在實(shí)驗(yàn)中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。（1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。（...
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這樣做能防止胎牛血清產(chǎn)生沉淀
2021-05-30
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。如何避免胎牛血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍...
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